LA DIAGNOSTICA
La diagnosi di malattia mitocondriale si basa su un processo integrato e multidisciplinare, articolato in tappe successive.
Le informazioni ricavate dalla storia clinica del paziente e della famiglia, e dall'esame clinico vanno integrate con il
risultato delle indagini strumentali e di laboratorio. Il gruppo di neuropediatria metabolica dell'Istituto Neurologico "C. Besta",
coordinato dalla Dott.ssa Graziella Uziel, si occupa della valutazione clinica dei bambini con
sospetta patologia mitocondriale mentre l'ambulatorio dei pazienti adulti è effettuato dalla
Dott.ssa Costanza Lamperti e del Dott. Massimo Zeviani
(per approfondimenti v. "I nostri Servizi"). Queste malattie colpiscono prevalentemente il cervello e i muscoli, e quindi gli esami
neuroradiologici, come la Risonanza Magnetica Nucleare, e neurofisiologici, come i Potenziali Evocati, sono spesso indispensabili.
L'esame fondamentale, però, è, in molti casi, la biopsia muscolare, che si può esaminare al microscopio ottico ed elettronico
(studio morfologico), e fornisce il materiale biologico indispensabile per l'esame biochimico della catena respiratoria mitocondriale,
e per la ricerca delle mutazioni genetiche. Questo vale soprattutto nei casi pediatrici, in cui la sintomatologia è spesso aspecifica e
non è possibile stabilire con sicurezza la diagnosi sulla base del solo esame clinico.
Diagnostica di laboratorio
Per gli esami utili ad un primo screening è sufficiente un prelievo di sangue ed una raccolta delle urine delle 24 ore.
| Esame | Campione Biologico* | Commento |
| Glucosio | S | |
| Elettroliti | S | |
| Acido Lattico Acido Piruvico Alanina | S, L | Il prelievo di sangue deve essere effettuato senza laccio emostatico |
| Rapporto L/P | S | La valutazione del rapporto tra Lattato (L) e Piruvato (P) può essere molto utile nel determinare a quale livello della via metabolita è presente il difetto genetico |
| Ammonio | S | |
| Aminoacidi | S,U, L | La raccolta delle urine può essere fatta dopo un pasto o dopo un periodo di digiuno. Una "aciduria generalizzata" può indicare la presenza di una malattia mitocondriale |
| Acidi Organici |
U | La raccolta delle urine deve essere possibilmente delle 24 ore. Le urine, durante la raccolta, devono essere mantenute refrigerate in contenitore sterile e senza la presenza di conservanti. |
| Analisi delle Carnitine | S | Per una migliore interpretazione del dato, è meglio determinare le varie frazioni della carnitina: libera, esteri a corta e lunga catena, totale |
| Corpi chetonici | S,U | Da effettuare preferibilmente durante la crisi metabolica |
La valutazione dei risultati di questi esami da parte dello specialista può già orientare la diagnosi. Se però questi esami sono negativi,
questo non esclude completamente l'ipotesi di una malattia mitocondriale, ma sicuramente il sospetto diventa meno forte. In questo
caso può essere utile ripetere gli esami in particolari situazioni di stress energetico: durante una crisi metabolica spontanea
oppure eseguendo dei test metabolici (digiuno prolungato, carichi dietetici) da effettuarsi sotto stretta osservazione medica in regime di ricovero.
Biopsia muscolare
Attualmente viene eseguita mediante la tecnica "ad ago", che è molto meno invasiva rispetto alla tecnica "a cielo aperto"
che veniva utilizzata in passato. La biopsia ad ago viene effettuata in anestesia locale nei pazienti adulti, e in anestesia
generale nei bambini. Non necessita di punti di sutura, lascia una piccolissima cicatrice superficiale e non interferisce in alcun
modo con la funzione del muscolo biopsiato. E' importante che questo esame venga eseguito solamente presso un centro altamente
specializzato per garantire la correttezza tecnica del prelievo e l'idonea conservazione del materiale, ma anche per assicurare
l'esecuzione di tutte le indagini necessarie.
Sul tessuto muscolare biopsiato si possono eseguire le seguenti indagini:
In casi particolari, si possono effettuare anche indagini in microscopia elettronica, utili per vedere la
struttura dei mitocondri e valutare eventuali proliferazioni anomale.
Biopsia cutanea
La biopsia cutanea e la successiva coltura di fibroblasti è utile in molti casi:
Il nostro Centro possiede un patrimonio unico in Italia di più di 2000 linee di fibroblasti di pazienti con patologie metaboliche congenite.
Tutti gli esami riportati vengono correntemente eseguiti presso il nostro Istituto
Fibre muscolari Rosse Stracciate (Ragged Red Fibers), tipiche di molte miopatie mitocondriali.
Colorazione istochimica per la succinico deidrogenasi: la fibra "ragged-blue" ha lo stesso significato delle fibre ragged-red: l'aumentata intensita' della reazione indica un'abnorme proliferazione mitocondriale.
Numerose fibre muscolari risultano negative (bianche) alla colorazione per la citocromo c ossidasi.
Modifiche ultrastrutturali: la microscopia elettronica mostra mitocondri anormali per forma e struttura.